使用组织分离复壮平菇菌种，简便易行、效果明显，很适宜一般种植户。其操作技术要点是：
1. 在菇床、菌墙或菌袋中选择出菇早、无杂菌病毒侵染、株型紧凑、圆整肉厚、色泽美观、七八成熟的第一潮菇的肥壮菇体作种菇；
2. 在种菇中部取最大的3-4张菇片，用70%的酒精轻擦表面后置于接种箱内消毒；
3. 将菇片纵向撕开，在菇盖与菇柄交界处取一米粒大小的菇肉组织接于PDA培养基上。每只菇片可接数支试管，每次应多分离几支试管，方便选优；
4. 将试管置于适温下培养；
5. 培养期间每天都要检查发菌情况，从中选择菌丝浓白粗壮、边缘整齐、长速正常、无绿、黄及浆糊状等杂菌斑点的，表现最好的分离种转接于木屑麸皮培养基上，于适温下培养；
6. 菌丝发满后，在接种箱内去掉棉塞，用蜡封口，用黑膜包裹后于4-9℃的冰箱内保藏；
7. 在下一个生产季节与原始保藏种作对比试验，择优作为生产用种。每季都如此复壮，能逐步提高菌种各方面的性状，使发菌加快，抗逆抗杂性增强，质量明显提高。
8. 有条件的可以先采用孢子分离法进行分离培养，并栽培出菇，然后从中选择较好的菇体（种菇选择标准同上），再采用上述方法进行组织分离，其复壮效果更好。 注意：孢子分离的母种不能直接应用到生产中。
