3.灭菌与接种
将装好的菌袋置灭菌锅内进行消毒灭菌，灭菌时间可根据锅内容积大小与装料多少而定，一般常压蒸气灭菌100℃持续6～8小时，然后取出放在冷却室内，待料温降至20℃左右时接种。接种时选用菌丝洁白、健壮、生长旺盛、无杂菌污染的菌种，在无菌室或接种箱内，严格按照无菌操作规程进行接种，整套程序要求严密迅速，以防杂菌侵入。接种时先将原种(二级扩大种)瓶口打开，以酒精灯火焰封口，然后再将栽培袋口解开，用接种钩迅速取出原种接入栽培袋内，每袋接种量约为25～50g，接完种后，在袋口塞一棉团，松紧适宜，扎好袋口，有利通用供氧，促进猴头菌丝健壮生长。
4.栽培与管理
接种后将栽培袋移进栽培室，排放于地面或角铁层架上，室温以控制在25～30℃为宜，约30～35天，菌丝即可长满菌袋，低于12℃生长缓慢，高于33℃则需通风降温。当猴头菌蕾出现后，可将室温降至18～28℃，但以20～23℃发育最好，现蕾最快。当菌蕾长至瘤状突起时，即可在其顶上塑料薄膜处撕一小孔，或解开袋口，再将室温降至16～18℃，此时管理应注意通风换气，每日早、中、晚各打开门窗1次，每次通风约15～20分钟。各阶段对空气相对湿度的要求差异较大，菌丝生长阶段一般以10%～20%为最好；子实体生长阶段则以90%～95%为宜。低于90%，生长缓慢，肉质低劣，子实体瘦小；低于90%，生长缓慢，肉质低劣，子实体瘦小；低于60%很难现蕾，即便出现幼蕾，也会很快干枯；高于95%以上，则易出现畸形蕾，多表现为松散分枝型，且易腐烂变质。猴头菌喜光，需有一定的散射光条件下，在完全黑暗条件下，菌丝虽能生长，但很难形成子实体。因此在培养猴头菌时必须保持室内明亮，最好有散射光，避免阳光直射。一般在猴头子实体生长期间，要注重勤喷雾状水以利提高产量。
秋季气候凉爽，雨量充沛，空气湿度较大，是栽培猴头菌的最佳季节，其它季节应根据猴头菌对环境条件的要求采取相应的措施，栽培才能成功。
5.采收
当子实体球块长满菌刺，菌刺长的约1cm左右，色泽白色，即可采收。采收时，以左手按袋，右手紧握子实体慢转而下，注意菌柄不宜留茬过高，以免喷水后腐烂，招引杂菌及虫害。
