【作者】孙剑秋 周东坡 马玉超 李晶 解玉红 张鹏 平文祥
【机构】齐齐哈尔大学生命科学与工程学院；黑龙江大学生命科学学院 齐齐哈尔161006
【摘要】以紫杉醇产生菌树状多节孢HQD33的诱发突变株UL50-6和UL40-19 为出发菌株,将收集到的出发菌株UL50-6和UL40-19的菌丝体分别用pH5.5~6.0的0.7mol/L NaCl配制的3%溶壁酶、2%蜗牛酶、1%溶菌酶组成的复合酶系,30℃恒温酶解3~5h,制备原生质体。两菌株的原生质体经纯化后分别用热和紫外线灭活,其中UL50-6的原生质体在54℃热灭活5分钟,UL40-19的原生质体在30W紫外灯下,30cm,照射85秒进行紫外灭活,双亲株的原生质体存活再生率为零。同时对融合条件进行了初步探索,以含有Ca2+和Gly的35%~40%的PEG作为融合剂,融合时间为20分钟时,融合率可以达到4.44?0-2~6.92?0-2。对融合株TPF-1与双亲株的形态学、可溶性蛋白、过氧化物同工酶进行分析,确证其为双亲株的融合子。
【基金】黑龙江省自然科学基金资助项目(93-C-11)； 黑龙江省“九五”重大攻关项目(G98C20-16-1)；
【关键词】树状多节孢; 原生质体; 融合; 灭活;