【作者】张伟杨晓野王瑞祝晓蕊王新芳梁萌
【机构】内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室
【摘要】为了更准确快捷地评价利用酶解法酶解捕食性真菌Duddingtonia flagrans菌丝产生的原生质体数量及菌丝细胞壁降解情况,采用活体荧光染料羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE),对该捕食性真菌菌丝酶解后产生的原生质体进行荧光标记,分别考察了标记浓度、标记时间、孵育温度对原生质体标记效果的影响,并观察CFSE标记后的原生质体再生情况。结果表明CFSE终浓度为10μmol/L,标记时间为15min,孵育温度为36℃,是CFSE标记捕食性真菌原生质体的理想条件,该试验同时表明CFSE不影响原生质体的再生率。CFSE作为一种活细胞示踪荧光探针,可以快速高效地标记捕食性真菌原生质体,该方法为捕食性真菌原生质体制备质量的快速评价提供了新的思路。
【基金】国家自然科学基金(31460656)； 内蒙古自治区研究生教育创新计划研究生科研创新资助项目(B20151012910Z)； 内蒙古自然科学基金(2015MS0308,2014MS0339)； 家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金项目(SKLVEB2015KFKT013)~~；
【关键词】羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE); 荧光标记; 标记浓度; 标记时间; 孵育温度; 原生质体再生;