榆耳、毛木耳等耳片较厚，组织分离比较容易成功。由于这类耳表面附有大量的杂菌孢子，尽管进行严格的表面消毒也很难做到十分彻底，所以，用剪取一小块子实体的办法来分离木耳纯菌种，成功率是非常低的。但若把这些耳的子实体撕裂，从耳片内侧挑取一小块组织来培养，就会大大提高分离的成功率。具体方法如下：把分离用的新鲜子实体用流水冲洗干净，用干净的纱布揩干，放入接种箱内，随后再用无菌水冲洗二三次，用无菌纱布擦干水分，然后以75％酒精进行表面消毒。可将子实体上下二层撕开，在无菌操作下，用接种针在子实体内侧括取半粒芝麻大小的一块组织，接种到马铃薯培养基斜面上即可。
但黑木耳、琥珀木耳、皱木耳的这类的子实体，上下层撕不开，可用解剖刀在子实体边缘切一斜口，然后沿斜口的方向撕裂，挑取未触及刀片部分的内层，接种于PDA综合培养基上。25—28℃下培养3—4天后即可看到菌丝萌发。及时挑取菌丝提纯即可获得成功。
在黑木耳野外普查过程中，我们常常发现有价值的耳片往往很少，有时还必须采用干耳片将种取出来，那如何用干耳片分离菌种呢？
笔者介绍一下这方面的技术。1、耳片表面消毒：用70-75%的酒精浸泡干耳片一分钟。再用无菌水冲洗3次，洗去残余酒精，最后用无菌滤纸吸净耳片上的水分。2、耳片组织切块：在无菌培养皿上，用解剖刀将耳片切成2毫米宽，3-5毫米长快。其目的就是切除被酒精浸泡的边缘，露出新鲜断面。3、接种培养：用镊子尖取一切块，使组织新鲜断面与琼脂培养基表面垂直，并插于培养基中。这样有利于组织吸水膨胀，菌丝恢复活力。25—28℃下培养3—4天后即可看到菌丝萌发。及时挑取菌丝提纯即可获得木耳纯菌种。（作者MYB,转载请注明来源于易菇论坛）