【作者】范艳华 张永军 罗志兵 冯静 方卫国 裴炎
【机构】农业部生物技术与作物品质改良重点实验室 重庆市农业生物技术重点实验室 西南大学生物技术中心农业部生物技术与作物品质改良重点实验室 重庆市农业生物技术重点实验室 西南大学生物技术中心 重庆400716
【摘要】我们从球孢白僵菌中克隆了丝氨酸蛋白酶Pr1类基因CDEP-1。为明确CDEP-1的功能、评价其在害虫生物防治中的潜力,需要大量制备具有生物活性的CDEP-1编码蛋白。由于大肠杆菌系统表达真核基因存在产物复性困难的问题,本文利用毕赤酵母系统来表达CDEP-1。结果表明,CDEP-1可在毕赤酵母中高效的分泌表达,而且产物活性高,甲醇诱导48h后上清液中的酶活即可达到38,266U/L。诱导表达的上清液经浓缩后进行凝胶过滤层析,得到了CDEP-1的初纯品,蛋白质含量为50mg/L。将纯化的蛋白酶CDEP-1免疫家兔,制备了CDEP-1的抗血清。Westernblotting分析表明,制备的抗血清可特异性地检测CDEP-1。
【基金】国家重点基础研究发展计划(973)项目(2003CB114203)； 国家高技术研究发展计划(863)项目(2002AA245021)；
【关键词】毒力因子; 凝胶过滤层析; 抗血清;